Molecular detection of human astrovirus in an urban sewage treatment plant in Rio de Janeiro, Brazil

The objective of this study was to evaluate the prevalence and dissemination of human astroviruses (HAstV) in the environment by analyzing urban sewage samples from a wastewater treatment plant in the city of Rio de Janeiro, Brazil. A one-year study was performed with a total of 48 raw and treated sewage composite samples, which were collected biweekly from an activated sludge plant. Virus particles were concentrated by the adsorption-elution method using negatively charged membranes associated to a Centriprep Concentrator® 50 (Nihon Millipore). HAstV were detected in 16.7 percent of the samples in raw and treated sewage by using both qualitative and quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reactions (RT-PCR and qPCR, respectively). Positive untreated sewage sample exhibited mean values of 1.1 x 10(4) gEq/mL. The qPCR sensitivity was 18 gEq/reaction. Through utilization of qPCR, a HAstV recovery efficiency of 4.2 percent and 4.3 percent was demonstrated for raw and treated sewage samples, respectively. The presence of HAstV in both the raw and treated sewage samples demonstrated the dissemination of these viruses in the environment as well as viral permanence after sewage treatment. There was a reduction in the total and faecal coliform levels, indicating efficiency of the wastewater treatment plant.

Detecção e caracterização molecular de Rotavirus grupo A em Igarapés da cidade de Manaus, Amazônia Central / Detention and molecular characterization of rotavirus group A in Igarapés of the city of Manaus, Central Amazônia

Os rotavírus grupo A (RV-A) são a causa mais comum de diarréia grave na infância em todo o mundo e estão associados a milhares de mortes ocorridas anualmente, principalmente em países em desenvolvimento. Estes vírus são transmitidos pela via fecal-oral, sendo excretados em altas quantidades nas fezes, podendo contaminar águas superficiais pelo contínuo despejo de esgotos domésticos. O processo de urbanização desordenada, ocorrido na cidade de Manaus, Amazônia Central, ocasionou inúmeros problemas no âmbito da saúde pública, como diminuição nas condições de saneamento básico, refletindo no aumento de doenças de veiculação hídrica como as diarréias. Com o objetivo de investigar a presença de RV-A em águas de igarapés de Manaus foi estabelelecido uma metodologia de concentração viral associada a diferentes protocolos de detecção molecular. No período de agosto de 2004 a junho de 2005, quatro campanhas de coletas de água foram realizadas em 13 pontos georeferenciados definidos de acordo com diferentes graus de influência antrópica.

As amostras de água foram concentradas pelo método de adsorção-eluição utilizando membrana de filtro carregada negativamente e concentrador Centriprep YM50. Diferentes protocolos qualitativos de reação em cadeia da polimerase precedida de transcrição reversa (RT -PCR) foram utilizados para detecção dos genes que codificam para as principais proteínas do capsídeo (VP4, VP6 e VP7). A análise conjunta dos resultados de RT-PCR demonstrou que 63% (33/52) das amostras foram positivas para RV-A, 75% destas provenientes de igarapés situados nas áreas urbanas. Dez amostras foram caracterizadas como G1, 15 como P[8], sendo uma mista P[4], P[8]. O subgrupo II, caracterizado pelo seqüenciamento parcial do gene 6, foi o único encontrado. A técnica de SYBR Green PCR quantitativo em tempo real para detecção e quantificação de RV-A foi estabelecida, permitindo avaliar à eficiência do método de recuperação viral, que variou de 13% a 86% em diferentes matrizes aquáticas. A análise comparativa dos métodos de PCR qualitativo e quantitativo demonstrou que este último foi significativamente mais sensível na detecção de RV-A em águas de igarapé. Este estudo, pioneiro no Brasil na avaliação da contaminação por RV-A em águas de igarapés, demonstrou a eficiência das metodologias de concentração, detecção e caracterização molecular utilizadas, abrindo novas perspectivas para a avalaiação da qualidade da água no Brasil, assim como para estudos de epidemiologia molecular de RV-A.